基本信息

貨號(hào)：21202（1 mg）

儲(chǔ)存條件：-20℃避光

簡(jiǎn)介

細(xì)胞內(nèi)pH在許多細(xì)胞事件中起著重要的調(diào)節(jié)作用，包括細(xì)胞生長(zhǎng)，鈣調(diào)節(jié)，酶活性，受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，離子轉(zhuǎn)運(yùn)，內(nèi)吞作用，趨化性，細(xì)胞粘附和其他細(xì)胞。近年來(lái)，pH敏感性熒光染料已被廣泛應(yīng)用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH的變化。使用熒光pH指示劑的成像技術(shù)還允許研究人員使用其他技術(shù)（如微電極）實(shí)現(xiàn)更大的空間分辨率和采樣密度來(lái)研究這些過(guò)程。其中，2'，7'-雙 - （2-羧乙基）-5-（和-6） - 羧基熒光素（BCECF）是常用的pH探針，因?yàn)樗捎糜诒嚷时O(jiān)測(cè)細(xì)胞pH。 BCECF AM是BCECF的細(xì)胞滲透型。 AAT Bioquest開發(fā)了一種更好的版本，單一異構(gòu)體化合物BCFL，AM使得pH測(cè)量比BCECF，AM更加可重復(fù)，它由相當(dāng)多的不同異構(gòu)體組成。

物理化學(xué)特性

分子量：~808.69

溶劑：二甲基亞砜（DMSO）

光譜特性：Ex / Em = 503 / 528nm

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞的測(cè)定方案

在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞®

添加等體積的BCECF，AM染料上樣溶液（100μL/孔用于96孔板）在37℃下孵育1小時(shí)®

洗滌并用HHBS替換®

讀取熒光，在Ex / Em = 490 / 535 nm，加入50μL/孔化合物（或505/535和430/535 nm比例）

注意：以下是標(biāo)準(zhǔn)單元負(fù)載的推薦步驟。 該步驟僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)具體需要進(jìn)行修改。

1.根據(jù)需要準(zhǔn)備細(xì)胞。 例如，將粘附細(xì)胞在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以40,000至80,000個(gè)細(xì)胞/孔/100μL過(guò)夜，96孔或10,000至20,000個(gè)細(xì)胞/孔/25μL，用于384孔板。

注意：應(yīng)對(duì)每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，以確定細(xì)胞密度。

2.準(zhǔn)備BCECF，AM染料加載溶液：

2.1在高質(zhì)量無(wú)水DMSO中制備2至20 mM BCECF，AM原液。 應(yīng)立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20 oC重新冷凍。

注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。

2.2在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）中制備5-50 uM BCECF，AM染料加載溶液

3.運(yùn)行pH分析

3.1將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）BCECF，AM染料加載溶液加入細(xì)胞板（來(lái)自步驟2.3）。

注意：如果您的化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/孔）。

3.2將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

3.3用HHBS洗滌并更換染料加載溶液。

3.4使用HHBS或所需的緩沖液制備復(fù)合板。

3.5通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 535nm（在515nm處截止）或505 / 535nm和430 / 535nm（在515nm處截止）處的熒光進(jìn)行pH測(cè)定以進(jìn)行比率測(cè)量。 添加化合物為50μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）。

注意：化合物應(yīng)在化合物添加后3至5分鐘內(nèi)完成，但在測(cè)定開發(fā)過(guò)程中建議至少8分鐘的數(shù)據(jù)收集。