基本信息
貨號：21506（1 mg）
儲存條件：儲存在-20°C，干燥并避光
保質(zhì)期：到期日為自收到之日起12個月
簡介
Thiolite?Blue是用于測量硫醇化合物靈敏的傳感器之一。 它在與硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反應(yīng)時產(chǎn)生藍色熒光加合物。 它可用于量化蛋白質(zhì)上半胱氨酸的數(shù)量。 我們用它來熒光測定谷胱甘肽。它與含巰基的化合物反應(yīng)后具有> 200倍的熒光增強。 Thiolite?Blue是mBBr（monobromobimane）的優(yōu)良替代品，因為它們具有相似的spcetral屬性。 與mBBr相比，Thiolite?Blue的硫醇加合物具有比mBBr更強的熒光和吸收，使其成為比溴代溴醚更敏感的硫醇探針。Thiolite?Blue針對細胞內(nèi)硫醇檢測進行了優(yōu)化。它在細胞外是非熒光的，消除了洗滌步驟并減少了測定背景。
物理化學特性
分子量：331.28
溶劑：二甲基亞砜（DMSO）
光譜特性：激發(fā)= 335nm; 發(fā)射= 460nm
用于流式細胞儀的ThioliteTM Blue AM的測定方案的實例
簡要總結(jié)
使用測試化合物制備細胞®
添加1X染料工作溶液®
在室溫或37 oC下孵育染料染料10至30分鐘®
去除染料工作溶液®
用EX/ Em = 335/460 nm的流式細胞儀進行分析
注意：以下是我們推薦的細胞巰基測定方案。 該方案僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。
1.準備Thiolite Blue?AM工作溶液：
在高質(zhì)量無水DMSO中制備1至5 mM的Thiolite?Blue原液。 應(yīng)及時使用原液; 需要將任何剩余的溶液等分并在-20℃冷凍。
注意：未使用的Thiolite Blue原液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20oC，避光。
2.準備1X染料工作溶液
在使用前，在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7）中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟1），制備1X染料工作溶液。 通過渦旋將它們充分混合。
注意：染料工作溶液的濃度應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗確定不同的細胞類型和/或?qū)嶒灄l件。 建議在至少超過十倍范圍的濃度下進行測試。 Jurkat細胞中的推薦濃度為1-10uM。
3.用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞：
3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間。
3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。
3.3將細胞重懸于1 mL染料工作溶液中（來自步驟2）。
可選：可以直接將DMSO儲備溶液添加到細胞中，無需去除培養(yǎng)基（例如，將1μL1mMDMSO儲備溶液加入1 mL細胞中）
3.4在室溫或37°C下用染料溶液孵育細胞10到30分鐘，避光。
3.5從細胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細胞。 將細胞重懸于1mL預熱的HHBS或培養(yǎng)基中，得到每管2-10×105個細胞。
3.6使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監(jiān)測Ex / Em 335/460 nm處的熒光變化。