基本信息
貨號：22661
儲存條件：冰箱，避光
適用儀器：熒光顯微鏡
簡介
肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細(xì)胞中。 它也是高度保守的蛋白質(zhì)之一，在藻類和人類等多種物種中的差異不超過20％。 肌動蛋白是細(xì)胞中兩種細(xì)絲的單體亞基：細(xì)絲，細(xì)胞骨架的三個主要成分之一，以及細(xì)絲，是肌細(xì)胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細(xì)胞過程，包括肌肉收縮，細(xì)胞運動，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細(xì)胞器運動，細(xì)胞信號傳導(dǎo)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的建立和維持。
我們的Cell Navigator?熒光成像試劑盒是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記亞細(xì)胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細(xì)胞核等?；罴?xì)胞區(qū)的選擇性標(biāo)記為研究空間和時間細(xì)胞事件提供了一種強大的方法。
該特定試劑盒設(shè)計用于標(biāo)記具有綠色熒光的固定細(xì)胞中的F-肌動蛋白。 該試劑盒使用綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物，其選擇性結(jié)合F-肌動蛋白。 該綠色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物是F-肌動蛋白的高親和力探針。 當(dāng)以納摩爾濃度使用時，phallotoxins是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞實驗。 該試劑盒為所有必需組件提供優(yōu)化的染色方案，該方案功能強大，只需極少的手動操作時間。 它是保存特定細(xì)胞熒光圖像的**工具。 鬼筆環(huán)肽綴合物具有與FITC類似的光譜性質(zhì)（Ex / Em = 500 / 520nm）。 它也可以用于使用FITC濾光片（Ex / Em = 490 / 525nm）的熒光顯微鏡演示。
試劑盒組成
分析方案
簡要總結(jié)
準(zhǔn)備樣品（微孔板孔）®
從板中取出液體®
添加100μL/孔的iFluor?488-鬼筆環(huán)肽溶液®
在室溫下染色細(xì)胞15到60分鐘®
洗滌細(xì)胞®
在顯微鏡下檢查樣品Ex / Em = 488 / 520nm
注意：打開前將所有組件加熱至室溫
詳細(xì)步驟
1.準(zhǔn)備1X iFluor?488-鬼筆環(huán)肽工作溶液：
將10μL的iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽（組分A）加入10mL標(biāo)記緩沖液（組分B）中。
注1：未使用的1X iFluor?488-鬼筆環(huán)肽原液應(yīng)等分并保存在-20oC。避光保存。
注2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。 應(yīng)相應(yīng)地制備iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度。
2.染色細(xì)胞：
2.1進行甲醛固定。 在室溫下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育細(xì)胞10-30分鐘。
注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS沖洗固定的細(xì)胞2-3次。
2.3可選：將0.1％Triton X-100在PBS中加入固定細(xì)胞（來自步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。
2.4將100μL/孔（96孔板）的iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽工作溶液（來自步驟1）加入固定的細(xì)胞（來自步驟2.2或2.3），并在室溫下將細(xì)胞染色15至60分鐘。
2.5用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以去除多余的染料，然后使用FITC通道進行板密封和成像。
圖1.用4％甲醛固定的HeLa細(xì)胞的熒光圖像，然后在Costar黑色96孔板中用Cell Navigator TM FActin標(biāo)記試劑盒*綠色熒光*染色。 細(xì)胞分別用iFluor TM 488-鬼筆環(huán)肽（Cat＃22261，Green）和細(xì)胞核染色DAPI（Cat＃17507，藍色）標(biāo)記。 在固定之前，用ER Red TM（Cat＃22636，Red）染色細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。
參考文獻
1. Szczesna D, Lehrer SS (1993). The binding of fluorescent phallotoxins to actin in myofibrils. J Muscle Res Cell Motil, 14(6), 594.
2. Johnson S C, Nancy M. McKenna M N, and Wang Y (1988). Association of microinjected myosin and its subfragments with myofibrils in living muscle cells. J Cell Biol, 107(6), 2213.
3. Wang K, Feramisco JR, Ash JF (1982). Fluorescent localization of contractile proteins in tissue culture cells. Methods Enzymol, 85 Pt B, 514.
4. Miki M, Barden JA, dos Remedios CG, Phillips L, Hambly BD (1987). Interaction of phalloidin with chemically modified actin. Eur J Biochem 165, 125.
5. Cooper JA. (1987). Effects of cytochalasin and phalloidin on actin. J Cell Biol 105, 1473.