DNA定量是DNA樣品制備過程中的一項(xiàng)重要工作，Helixyte 綠色雙鏈DNA定量檢測試劑盒提供了一種用Helixyte Green BR快速測定dsDNA的方法。該測定法在三個數(shù)量級上是線性的，并且比紫外線吸收度讀數(shù)靈敏度高幾個數(shù)量級。Helixyte Green-BR與dsDNA結(jié)合后熒光增強(qiáng)，序列依賴性小，可準(zhǔn)確測定基因組DNA、病毒DNA、miniprep-DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物等多種來源的DNA樣品。該方法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度的選擇性，并且被優(yōu)化以測量從10 pg/ul到10 ng/ul的DNA濃度。
適用儀器
熒光酶標(biāo)儀
Ex:490 nm
Em：530 nm
Cutoff：510 nm
推薦孔板:純黑色孔板
實(shí)驗(yàn)方案
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡要概述
1. 準(zhǔn)備dSDNA標(biāo)準(zhǔn)品，測試樣品和染料工作溶液
2. 添加DNA標(biāo)準(zhǔn)液或測試樣品（50 uL）
3. 添加Helixyte Green-BR工作溶液（50 uL）
4. 在室溫下孵育2分鐘
5. 檢測Ex / Em = 490/530 nm的熒光強(qiáng)度
提示：操作前將所有組件加熱到室溫。暫時沒有關(guān)于Helixyte Green dsDNA染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑，應(yīng)謹(jǐn)慎處理。DMSO儲備溶液應(yīng)特別小心，因?yàn)橐阎狣MSO有助于有機(jī)分子進(jìn)入組織。
溶液配制
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
將100 uL的100 ug / mL dsDNA標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）添加到400 uL的測定緩沖液（組分B）中，以生成20 ug / mL的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后用測定緩沖液（組分B）進(jìn)行1：3的系列稀釋，以得到0至20 ug / mL的系列稀釋的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品。
工作溶液配制
Helixyte Green BR工作溶液：將50 uL Helixyte Green BR（組分A）添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.050 mL。通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。 注意：我們建議在塑料容器中而不是玻璃中制備該溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙降讲ＡП砻?。為了獲得結(jié)果，應(yīng)在準(zhǔn)備后的幾個小時內(nèi)使用此溶液。
實(shí)驗(yàn)步驟
表1. 在透明底部96孔微孔板中的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。DS = dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品（DS1-DS7，20至0.027 ug / mL）; BL =空白對照；TS =測試樣品
|
BL
|
BL
|
TS
|
TS
|
|
DS1
|
DS1
|
…
|
…
|
|
DS2
|
DS2
|
…
|
…
|
|
DS3
|
DS3
|
|
|
|
DS4
|
DS4
|
|
|
|
DS5
|
DS5
|
|
|
|
DS6
|
DS6
|
|
|
|
DS7
|
DS7
|
|
|
表2. 每個孔的試劑組成
|
Well
|
Volume
|
Reagent
|
|
DS1-DS7
|
50 uL
|
連續(xù)稀釋 (20 to 0.027 ug/mL)
|
|
BL
|
50 uL
|
緩沖液 (Component B)
|
|
TS
|
50 uL
|
實(shí)驗(yàn)樣品
|
1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，制備dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品（DS）、空白對照品（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 uL試劑，而不是50 uL。注：根據(jù)需要處理細(xì)胞或組織樣本。
2. 添加50 uL Helixyte Green-BR染料工作液（2X）分別加入dsDNA標(biāo)準(zhǔn)液、空白對照液和供試品中，使總分析體積為100ul/孔。對于384孔板，添加25 uL的Helixyte Green-BR染料工作溶液，每孔總體積為50 uL/孔。
3. 在室溫下避光培養(yǎng)2分鐘。
4. 在Ex/Em=490/530 nm（截止=515nm）處用熒光酶標(biāo)儀檢測熒光強(qiáng)度。
圖示
圖1.用Helixyte Green dsDNA定量試劑盒在96孔黑色孔板中測量了dsDNA劑量反應(yīng)。