花青染料通常表現(xiàn)出非常大的摩爾吸收率（約150000至300000M-1 cm-1）以及適度的量子產(chǎn)率，從而產(chǎn)生及其明亮的熒光信號(hào)。事實(shí)證明，花青在許多領(lǐng)域都非常有用，包括生物成像、細(xì)胞學(xué)、熒光技術(shù)和分析化學(xué)等，對(duì)于某些生物學(xué)應(yīng)用，花青可以有利地替代其他常規(guī)染料，它們也可以應(yīng)用在各種生物學(xué)。
常見(jiàn)的花青染料
花青染料中常使用的是發(fā)黃綠色熒光的Cy3(Ex:550nm,Em:570nm)和發(fā)紅色熒光的Cy5(Ex:650nm,Em:670nm)。由于它們具有少量光譜重疊，Cy3和Cy5通常組合為2色檢測(cè)。Cy3可通過(guò)各種熒光儀、成像儀器和具有TRITC標(biāo)準(zhǔn)濾波片的顯微鏡來(lái)檢測(cè)。由于Cy5消光系數(shù)高，它以成為遠(yuǎn)紅色熒光染料的流行替代品。
圖為Cy3(左)、Cy5(中)、Cy7(右)的激發(fā)和發(fā)射光譜
表一.花青染料的光譜特性
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花青染料
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激發(fā)光線(xiàn)(nm)
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Ex/Em(nm)
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濾波片組
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消光系數(shù)
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熒光量子產(chǎn)率
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Cy3
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532
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554/568
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Cy3/TRITC
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150000
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0.15
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Cy5
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633-647
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650/669
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Cy5
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250000
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0.27
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Cy7
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730
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754/778
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Cy7
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250000
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0.3
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磺化與非磺化花青染料
磺化與非磺化花青染料具有非常相似的熒光特性，在許多應(yīng)用中可以互換使用。它們之間的差異主要在于溶解度?；腔臑樗苄?，非磺化的則為脂溶性。
表2.磺化與非磺化花青的比較
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Cy3
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Cy5
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Cy7
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形式
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磺化
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非磺化
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磺化
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非磺化
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磺化
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非磺化
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Ex/Em(nm)
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554/568
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650/669
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754/778
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濾波片組
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Cy3/TRITC
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Cy5
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Cy7
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消光系數(shù)
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150000
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140000
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250000
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230000
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250000
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250000
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熒光量子產(chǎn)率
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0.10
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0.07
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0.27
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0.16
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0.12
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0.2
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