實(shí)時聚合酶鏈反應(yīng)（real-time PCR），也稱為定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR），是一種基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的流行的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。它可以在PCR期間（即實(shí)時）檢測目標(biāo)DNA分子的擴(kuò)增情況，而不是像常規(guī)PCR那樣在結(jié)束時進(jìn)行檢測。實(shí)時PCR可以定量（定量實(shí)時PCR）和半定量（即高于或低于一定數(shù)量的DNA分子）（半定量實(shí)時PCR）使用。實(shí)時PCR中有兩種檢測PCR產(chǎn)物的常用方法，包括（1）結(jié)合任何雙鏈DNA的非特異性熒光染料； （2）由寡核苷酸組成的序列特異性DNA探針，所述寡核苷酸用熒光報告物標(biāo)記，僅在探針與其互補(bǔ)序列雜交后才允許檢測。對于**種方法，對DNA結(jié)合染料進(jìn)行PCR的實(shí)時檢測有兩個要求，即（a）與雙鏈DNA結(jié)合時增強(qiáng)熒光；（b）對PCR的抑制作用*小。 SYBR Green主要用于各種qPCR應(yīng)用中。我們*近開發(fā)了新一代的SYBR Green Q4ever Green，用于解決SYBR Green的一些局限性，例如酶抑制。 Q4ever Green可以在PCR中使用，幾乎沒有PCR抑制作用，并提高了靈敏度。 Q4ever Green可用于檢測任何雙鏈DNA序列的擴(kuò)增。假設(shè)您的PCR引物設(shè)計合理且反應(yīng)特性良好，則無需探針，可以減少測定設(shè)置和運(yùn)行成本。作為SYBR Green，主要缺點(diǎn)是它可能產(chǎn)生假陽性信號。即因?yàn)镼4ever Green染料與任何雙鏈DNA結(jié)合。它也可以與非特異性雙鏈DNA序列結(jié)合。設(shè)計良好的引物不擴(kuò)增非靶序列，并進(jìn)行熔解曲線分析，這一點(diǎn)極為重要。